单项选择题

通过平板划线法获得可疑菌落,下图是平板划线示意图,划线的顺序为①②③④⑤。下列操作方法正确的是()

A.操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌
B.划线操作须在火焰上进行
C.在⑤区域中才可以得到所需菌落
D.在①②③④⑤区域中划线前后都要对接种环灭菌