不可以作为未知点突变的检测方法是（）

A.催化一条双链DNA3′端羟基与另一条双链DNA5′端磷酸根形成3′，5′磷酸二酯键
B.TaqDNA聚合酶具有3′→5′外切酶活性，PCR扩增过程中有校正功能
C.增加酶量可以提高反应速度，减少碱基错配
D.扩增的DNA片段越长，错配概率越大，每次循环移码突变率为1/8000左右
E.在引物的3′-OH末端加入脱氧单核苷酸，形成3′，5′磷酸二酯键

A.巢式PCR多用于比较难于扩增或含量比较低的模板
B.进行两轮扩增，第1次扩增的片段较第2次小
C.两次扩增的引物相同
D.巢式PCR比常规PCR更不容易出现污染
E.第1次扩增的产物作为第2次扩增的引物

A.引物浓度
B.初始模板量
C.TaqDNA聚合酶浓度
D.Mg浓度
E.反应变性的时间